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    配制培養基時(shí)的注意事項以及常見(jiàn)問(wèn)題分析

    日期:2023-10-25 | 中海生物技術(shù)文庫 | 瀏覽:1081 次

    一、配制培養基時(shí)的注意事項

     

    01

    培養基在滅菌前,需進(jìn)行加熱溶解(含瓊脂的培養基需煮沸4-6次至瓊脂完全溶解),再進(jìn)行分裝滅菌(應不超過(guò)1000mL);

    02

    含瓊脂培養基,若滅菌前未進(jìn)行加熱溶解,滅菌后需充分搖勻使用;

    03

    所有培養基不宜滅菌過(guò)度和長(cháng)時(shí)間保溫,特別是含糖量高的培養基,如沙氏葡萄糖瓊脂,滅菌過(guò)度或保溫時(shí)間過(guò)長(cháng)易使葡萄糖發(fā)生焦化,滅菌后的培養基顏色會(huì )變深,pH會(huì )下降,此外還會(huì )使蛋白胨中的維生素分解,降低培養基的營(yíng)養;

    04

    需另加添加劑的培養基通常在培養基冷卻至50℃左右時(shí)加入,已加入添加劑的瓊脂類(lèi)培養基不可熔化再次使用;

    05

    配制好的培養基需及時(shí)滅菌,不可久置;

    06

    培養基不可重復滅菌;

    07

    瓊脂培養基不可反復熔化使用;待用的瓊脂培養基可置47-50℃水浴保溫或50-60℃烘箱保溫,一般不可超過(guò)4小時(shí);

    08

    使用蒸餾水或純化水配制。飲用水或自來(lái)水中由于含礦物鹽離子,配制培養基會(huì )產(chǎn)生渾濁現象;

    09

    容器不易過(guò)滿(mǎn),容量至少應比培養基體積大20%。

     

    二、配制過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題分析

     

    01
    培養基顏色不正確

    (1)含有酸堿指示劑的培養基,若顏色不正確,通常是由于pH不正確導致的,加熱過(guò)度、錯誤的滅菌方式等都會(huì )導致此項問(wèn)題。

    (2)加熱過(guò)度導致某些成分分解或糖焦化,如SC培養基加熱過(guò)度會(huì )變紅,含糖量高的培養基,加熱過(guò)度通常會(huì )出現顏色加深,呈焦糖色或棕褐色。

    (3)某些成分變質(zhì),如血液久置易變黑,制成的平板顏色偏棕黑色。

     

    02
    培養基不凝固或凝固性差

    (1)稱(chēng)量錯誤

    (2)瓊脂分布不均勻

    (3)培養基pH不正確

    (4)加熱過(guò)度

    (5)瓊脂量不足

    滅菌前未加熱溶解,滅菌后未充分搖勻,

    會(huì )出現分層現象,瓊脂凝固在底層,上層不凝固

    03
    培養基產(chǎn)生沉淀

    (1)某些培養基原本就含有不溶性沉淀,如TTB,MC培養基等,配方中含有大量不溶性碳酸鈣。

    (2)滅菌前未充分溶解,如Fraser培養基中含有大量磷酸鹽,若滅菌前溶解不充足,滅菌后就會(huì )出現大量沉淀。

    (3)pH不正確,偏酸或偏堿都有可能使培養基中的部分金屬離子產(chǎn)生沉淀。

    (4)水的純度不夠,天然水中含有較多的礦物鹽離子,若未除凈,則易與培養基中的磷酸鹽反應生成沉淀。

    (5)添加劑加入溫度不正確,卵黃、血液等對溫度敏感的添加成分,若加入時(shí)溫度過(guò)高或溫差過(guò)大,易出現凝塊。

    (6)稱(chēng)量錯誤。

    (7)試劑加入順序不正確。

    04
    培養基污染

    (1)滅菌方式不正確,導致滅菌不徹底

    (2)滅菌鍋的滅菌效力不達標

    (3)滅菌量過(guò)多,滅菌前未加熱溶解

    (4)培養基本身含耐熱菌較多

    (5)滅菌過(guò)程中,滅菌鍋內冷空氣未排干凈

    (6)滅菌鍋放置過(guò)滿(mǎn)

    (7)操作過(guò)程發(fā)生污染

    (8)分裝培養基器皿滅菌不充分

    (9)濾膜破損


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