培養基滅菌是滅菌類(lèi)型中比較特殊的一類(lèi)，除了要保證無(wú)菌之外，還要保持培養基的性能。不能一味的簡(jiǎn)單粗暴的提高滅菌條件，過(guò)度滅菌會(huì )造成培養基性能的損壞。雖然這些損壞在現有的分析條件下，可能第一時(shí)間或者永遠不能察覺(jué)。

1、科學(xué)為了方便讓步

除了基礎培養基之外，其余培養基會(huì )因為各種各樣的原因（抑菌效果、指示特性、高滲透壓保持等等），需要添加不耐熱的成分。理論上來(lái)說(shuō)，對于某些培養基，無(wú)菌的不耐熱補充成分應該在培養基冷卻到 50°C 左右后添加。而且，因為非常冷的液體可能會(huì )導致瓊脂凝膠化形成瓊脂薄片，應先將補充成分加熱至室溫。推薦通過(guò)培養箱加熱。補充劑需要輕輕徹底地混合到培養基中，然后盡快分配到最終平板中。

中國藥典中收錄培養基的配制過(guò)程也是如此描述的。但是，市場(chǎng)上的商業(yè)培養基幾乎都是將所有成分都混合在一起，一起配制一起滅菌。嚴格意義上來(lái)說(shuō)，與中國藥典中規定的內容并不完全相符。那原因是什么呢？就是為了方便操作。所以針對那些已經(jīng)讓步的培養基滅菌條件一定要注意，千萬(wàn)不要過(guò)度滅菌。

2、過(guò)度滅菌難以發(fā)現 

過(guò)度滅菌是導致培養基pH 漂移、顏色變深、出現沉淀、凝膠強度差和生長(cháng)性能下降的常見(jiàn)原因。如果加熱容器底部出現部分培養基成分濃縮，也可以產(chǎn)生這些效果。所以所有培養基在滅菌前都應溶解。溶解將減少培養基中發(fā)生的美拉德型反應（非酶褐變）的發(fā)生。

一般情況下，培養基滅菌之后的顏色都是主觀(guān)判斷。由于并沒(méi)有引入物理色度值測定，顏色變深很可能不被發(fā)現。不過(guò)，如果你能很好的使用化學(xué)滅菌指示膠帶，在一堆瓶子中發(fā)現不同還是很可能的。但是，如果所有瓶子都過(guò)度滅菌也會(huì )無(wú)法發(fā)現。

另外，作為培養基性能標桿的對照培養基并沒(méi)有規定具體滅菌條件。千萬(wàn)不要將對照培養基一起過(guò)度滅菌，不然很可能得出過(guò)度樂(lè )觀(guān)的結論。

當保存在瓶中的瓊脂培養基重新融化時(shí)，也會(huì )發(fā)生過(guò)熱效應，要注意重新融化的方式。某些類(lèi)型的培養基更容易受到這些影響，例如 pH 值等于或低于 5.0的瓊脂培養基對過(guò)熱特別敏感，因為瓊脂會(huì )水解并且凝膠強度下降。建議將 pH 值低于5.0的培養基區別于標準培養基滅菌程序滅菌。

3滅菌誤區

培養基滅菌保證無(wú)菌并不是要追求F0≥8。如果遇到滅菌不徹底的問(wèn)題，要查找問(wèn)題，不要簡(jiǎn)單延長(cháng)滅菌時(shí)間或者提高滅菌溫度。

滅菌失敗可能原因：

滅菌鍋性能下降，期間核查滅菌溫度和保持時(shí)間是否能達到。（基礎溫度與時(shí)間）

滅菌容器中放置的生物指示劑有沒(méi)有滅菌完全。（熱穿透效果）

滅菌體積有沒(méi)有超過(guò)1L/容器，裝載量有沒(méi)有過(guò)多。（驗證范圍的破壞）

培養基開(kāi)瓶時(shí)間過(guò)長(cháng)，保持不當，基礎微生物超標。（保藏條件實(shí)在達不到，問(wèn)問(wèn)培養基生產(chǎn)商有沒(méi)有小包裝）

配制環(huán)境中污染菌過(guò)多。（比如梅雨季節，配制間條件無(wú)法控制）

配制過(guò)程時(shí)間過(guò)長(cháng)。（盡你所能快配快滅，不要放置）

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