通常情況下，各種類(lèi)型的ELISA酶聯(lián)免疫吸附測定方法需用（固相包被→添加待測樣品→溫育→清洗→添加酶標物→溫育→清洗→添加底物→溫育→加終止液→比色→判定結論)這些操作順序步驟。中海生物酶聯(lián)免疫吸附試驗操作流程較為復雜，操作流程不恰當會(huì )產(chǎn)生很大的偏差。操作流程中應特別注意這些五個(gè)注意事項要點(diǎn)。

要點(diǎn)⑴伴隨著(zhù)疾病進(jìn)展或受別的方面影響，體內某種抗體的含量變化很大，需用對樣品做好預備處理，如適度稀釋血清樣品或離心血脂。在間接法中，適度稀釋樣品也能夠降低非特異性反應。

要點(diǎn)⑵液體進(jìn)料器通常用以添加樣品。在中海ELISA酶聯(lián)免疫測定中，海加樣有四次（加樣品/加酶結合物/加底物/加終止液）。添加樣品時(shí)，需要為每個(gè)樣品使用一個(gè)移液管?chē)娮?，以防止交叉污染。添加酶結合物及底物和終止液時(shí)不用替換吸嘴。

要點(diǎn)⑶在成批人工檢驗檢測時(shí)，還應特別注意操作流程時(shí)間誤差的影響。中'海樣品添加時(shí)長(cháng)和混合時(shí)長(cháng)的不同，促使抗原抗體反應和酶促反應的時(shí)長(cháng)不一致，對競爭法和定量檢測有很大影響。無(wú)意間的特別注意將會(huì )造成不正確的結論或不精準的量化分析。

要點(diǎn)⑷洗滌是影響酶聯(lián)免疫吸附中海ELISA試驗成功與失敗的重要環(huán)節。最終目的是除去未融合的免疫反應物，停止抗原-抗體反應，并除去與反應無(wú)關(guān)的樣品。反應過(guò)程中吸附在固體載體上的成分/游離酶標記和非特異性物質(zhì)。洗板機可用以洗板或手工洗板。前面一種清洗品質(zhì)高，各反應孔清洗結論勻稱(chēng)，批次間差異性小。手工洗版要特別注意操控每個(gè)孔的洗版效果，差異性不適合過(guò)大。

要點(diǎn)⑸為了更好地精準測定方法結論，中 海應使用酶聯(lián)免疫吸附試驗讀數器和微孔板讀數器。酶標儀可重復性能好。比色判讀可以選擇單波長(cháng)和雙波長(cháng)。應按照其反應液的不同顏色選擇不同的波長(cháng)濾光片，反應孔的吸光度值應通過(guò)空白孔的零點(diǎn)校準來(lái)確定好。

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