㈠培養基標準規定

培養基的規范制備是微生物檢驗中最基礎流程其一。當采用脫水培養基和別的成份時(shí)，尤其是哪些包含毒性成分如膽鹽或別的選擇劑的成份，應遵循制造廠(chǎng)商給予的優(yōu)秀實(shí)驗室明文規定和情況說(shuō)明。中.海培養基制備不合理會(huì )造成培養基產(chǎn)生品質(zhì)問(wèn)題，如含瓊脂培養基不凝固、酸堿值沒(méi)有在標準規定范圍內、滅菌后顏色變深等。

當采用中海脫水合成培養基制備培養基時(shí)，應嚴格遵守制造廠(chǎng)商給予的情況說(shuō)明做好制備。如凈重和體型\酸堿值值\制備時(shí)間\滅菌標準規定和操作流程步驟等。實(shí)驗室采用各種基本成分制備培養基時(shí)，應準確無(wú)誤依照配料配方做好制備，并記載相關(guān)信息及資料，如：培養基的命名和類(lèi)型\試劑級別\各成份的成分含量/制造廠(chǎng)商/批號/酸堿值值/培養基的體型/無(wú)菌措施包括實(shí)施方法/溫度和時(shí)間/配置時(shí)間/人員等，用于追溯。

㈡培養基用水

實(shí)驗用水的電導率在二十五度時(shí)不可高于二十五μS/cm，等同于電阻率≥0.4μω/c㎡，除了另有明文規定。水的微生物污染不可高于103CFU。依據GB4789.2菌落總數，應采用平板計數瓊脂培養基，在三十六度(±1)培養四十八小時(shí)(±2)做好按時(shí)微生物污染查驗。

㈢稱(chēng)重融解培養基

準確無(wú)誤稱(chēng)重所需求量的脫水合成培養基。必需時(shí)戴上口罩或在通風(fēng)柜中實(shí)際操作，以預防吸進(jìn)包含有毒物質(zhì)的培養基粉末。先添加適量的水，完全混合，防止中'海培養基結塊，隨后兌水至所需求量，適度進(jìn)行加熱，頻繁或持續拌和，使其快速分散化。如有需要，應完全徹底融解。含瓊脂的培養基應當在進(jìn)行加熱前泡浸數分鐘。

㈣培養基酸堿值測定調控

用酸堿值計測定酸堿值，必需時(shí)在滅菌前做好調控。除了另有明文規定，滅菌后培養基降溫至二十五度時(shí)，酸堿值應在標準規定酸堿值0.2范圍之內。通常采用濃度為40 g/L（約1摩爾每升）的氫氧化鈉溶液或濃度為約36.5 g/L（約1摩爾每升）的鹽酸溶液來(lái)調控培養基的酸堿值。假如滅菌后需要調節，請采用滅菌或滅菌溶液。

㈤分開(kāi)包裝培養基

將準備好的培養基分開(kāi)包裝到適度的器皿中，器皿的體型應起碼比培養基大二十倍。

㈥培養基滅菌消毒

應利用濕熱或過(guò)濾滅菌對培養基做好滅菌消毒。有很多培養基無(wú)法或不用高壓滅菌，可以采用煮沸滅菌。例如某些培養基如SC肉湯中包含對光和熱敏感的成分，煮沸后應快速降溫，遮光儲存。有很多實(shí)驗試劑可以不經(jīng)過(guò)滅菌就直接采用。

高壓滅菌器或中海培養基配制設施中的高溫滅菌

通常選用一百二十一度±3高壓滅菌十五分鐘，具體中 海培養基按食品微生物檢驗標準的規范做好滅菌。培養基的體積不可高于一千毫升，不然將會(huì )影響滅菌時(shí)過(guò)熱。所有的培養基實(shí)際操作應依照規范或使用方法做好。滅菌實(shí)際效果的操控是重要環(huán)節。加熱后，以適度的方式冷卻，以防止過(guò)熱。這針對大容量的敏感培養基極其關(guān)鍵，比如包含亮綠的培養基。

過(guò)濾器滅菌可以在真空或壓力下做好。使用孔徑為0.2微米的無(wú)菌設施和濾膜。對設施的所有的部份做好消毒或使用事先消毒的設施。有些過(guò)濾膜上附著(zhù)有蛋白質(zhì)或其他物質(zhì)，如抗生素。以便實(shí)現有效的過(guò)濾，過(guò)濾膜應當事先用無(wú)菌水潤濕。

查驗經(jīng)濕熱滅菌或過(guò)濾滅菌的培養基，尤其是酸堿值/顏色/滅菌實(shí)際效果和均勻度。

㈦培養基的使用

⑴瓊脂培養基溶解

將瓊脂培養基倒入沸水浴中或利用具備相同實(shí)際效果的方式方法溶解，如高壓滅菌器中的層流蒸汽。高壓瓊脂培養基應盡可能減少再加熱時(shí)長(cháng)，防止溶解后過(guò)熱。溶解后應在常溫下短期置放兩分鐘，防止玻璃容器碎裂。

將溶解的培養基倒入四十七至五十度。恒溫水浴冷卻保溫，可依據培養基真實(shí)凝固溫度適度提高水浴溫度，一直到使用。培養基達到四十七度至五十度的時(shí)長(cháng)與培養基的品種及體積和數量相關(guān)。溶解的培養基要盡早使用，靜放時(shí)長(cháng)不可以高于四鐘頭。未使用的培養基不可再度固化用以以后使用。敏感培養基要特別重視，溶解后的保溫時(shí)長(cháng)要盡可能降低。若有特別要求，請參考特定規范。倒入試樣的瓊脂培養基溫度應操控在四十五度上下。

⑵培養基除氧

需要時(shí)，將培養基倒入沸水浴或蒸氣浴中加熱十五分鐘后使用；加熱時(shí)松掉器皿的外蓋；加熱后蓋緊，快速冷卻至使用溫度如FT培養基。

⑶添加添加劑成分

當培養基冷卻至四十七~五十度時(shí)，應添加熱不穩定添加劑。無(wú)菌添加劑在添加前要置放在常溫下，以防止冷液體影響瓊脂凝結或形成薄片。將培養基與添加的成分緩慢充分混合，并盡早分開(kāi)包裝到預備器皿中。

⑷平板配制和保存

將溶解的培養基倒入皿中，在皿中形成厚度至少為三毫米、直徑為九十毫米的皿，通常添加十八毫升至二十毫升瓊脂培養基。平板扣上板蓋后，放置在水平面上冷卻凝固瓊脂。要是平板需要儲存或培養

要是時(shí)長(cháng)高于四十八小時(shí)或培養溫度高于四十度，則需要倒更多的培養基。凝固后的培養基應該及時(shí)采用或貯藏于避光處及5度±3冰箱密封袋中，避免中海生物培養基成份產(chǎn)生變化。在平板的底端或側邊做標識，主要包括名稱(chēng)、制備日期和有效期。合適的培養基編碼系統也可用作標識。

將倒入的平板放入密封袋中冷藏，可以延長(cháng)儲存期。為了避免冷凝水的產(chǎn)生，平板在放入袋中之前應該冷卻。儲存前不能干燥培養基表面。針對表面接種培養的固體培養基，應先將瓊脂表面干燥：揭開(kāi)平板蓋，在25度~50度的烘箱或培養箱中倒置平板；或者放在有對流的無(wú)菌凈化站，直到培養基表面的水滴沒(méi)有了。當心不能太過(guò)干燥。應依據制造商給予的說(shuō)明采用商用平板瓊脂培養基。

㈧廢棄培養基

所有的被污染和未采用的培養基都要以安全可靠的方式并依據最新法律法規對其進(jìn)行正確處理。

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