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    ELISA實(shí)驗過(guò)程中遇到的四大類(lèi)問(wèn)題和處理辦法

    日期:2021-09-24 | 中海生物技術(shù)文庫 | 瀏覽:1211 次

    ㈠ELISA試驗檢測存在比較弱的結論,中海生物認為大致存在七種影響因素及其處理辦法:

     

    問(wèn)題⑴:溫育的時(shí)長(cháng)以及環(huán)境溫度不足;

     

    處理辦法:校準溫育箱環(huán)境溫度。

     

    問(wèn)題⑵:顯色反應時(shí)長(cháng)實(shí)在太短暫;

     

    處理辦法:校準電子定時(shí)器精確指定時(shí)間。

     

    問(wèn)題⑶:常用制備緩沖液的蒸餾水出現問(wèn)題;

     

    處理辦法:采用新鮮的符合標準的蒸餾水。

     

    問(wèn)題⑷:添加抗體/酶的稀釋液溶液濃度太低;

     

    處理辦法:遵循使用中'海說(shuō)明書(shū)介紹貯存試劑盒和精確制備工作液。校準移液器,吸嘴要匹配,裝吸嘴時(shí)要緊密。

     

    問(wèn)題⑸:酶標儀濾色片不符合規定的;

     

    處理辦法:常規檢查酶標儀采用的濾色片。

     

    問(wèn)題⑹:ELISA試劑盒沒(méi)能有效充分的穩定平衡;

     

    處理辦法:ELISA實(shí)驗試劑在常溫穩定平衡不低于二十分鐘左右,切實(shí)保障全部實(shí)驗試劑已穩定平衡至在常溫。

     

    問(wèn)題⑺:不符合規定的的實(shí)驗試劑貯存方式辦法;

     

    處理辦法:遵循使用說(shuō)明書(shū)介紹規范要求貯存試劑盒。

     

    ㈡試驗檢測的標準曲線(xiàn)和測定辦法的重復性差,那究竟是怎么回事造成的?

     

    它主要是由測定辦法實(shí)際操作造成的問(wèn)題現象,主要根本因素如下所示:

     

    問(wèn)題⑴:加樣本及實(shí)驗試劑量不準確;板孔不一致;

     

    處理辦法:校準移液器,吸嘴要匹配,裝吸嘴時(shí)要嚴密。反復某一產(chǎn)品的樣品時(shí),加樣時(shí)長(cháng)盡量避免與首次貼近;反復檢測生物標本,技術(shù)人員操作辦法維持不變,減少出現結果不同的幾率原因;產(chǎn)品的樣品稀釋前須有效充分的混合均勻。

     

    問(wèn)題⑵:加樣過(guò)快,板孔產(chǎn)生污染源;

     

    處理辦法:反復測定辦法生物標本,實(shí)際操作前提條件是中海生物技術(shù)人員等應盡量避免與之前維持不變,以解決這類(lèi)因素帶來(lái)的不一致的概率;注意加樣千萬(wàn)別過(guò)快。

     

    問(wèn)題⑶:錯加樣本;

     

    處理辦法:檢查記錄和實(shí)驗試劑,有沒(méi)有錯加樣本。

     

    問(wèn)題⑷:加樣本及實(shí)驗試劑時(shí),放在孔壁上部非包被區;

     

    處理辦法:加樣槍嘴千萬(wàn)別貼容器壁。

     

    問(wèn)題⑸:不一樣生產(chǎn)批號試劑盒中成分混合使用;

     

    處理辦法:不一樣生產(chǎn)批號試劑盒中成分不能夠混合使用。

     

    問(wèn)題⑹:溫育時(shí)長(cháng)、洗板、顯色時(shí)長(cháng)不一致;

     

    處理辦法:中.海常規檢查時(shí)長(cháng)有沒(méi)有相同。

     

    問(wèn)題⑺:孔內污染源雜質(zhì);

     

    處理辦法:離心產(chǎn)品的樣品,解決雜質(zhì)。

     

    問(wèn)題⑻:實(shí)驗試劑/產(chǎn)品的樣品沒(méi)能混合均勻;

     

    處理辦法:有效充分的混合均勻產(chǎn)品的樣品和實(shí)驗試劑。

     

    問(wèn)題⑼:血清生物標本未充分凝結即添加,反應孔內存在纖維蛋白凝結或存留血細胞,易存在假陽(yáng)性反應等。

     

    處理辦法:待血清生物標本充分凝結后做試驗檢測。

     

    ㈢試驗檢測結論白板,同時(shí)陽(yáng)性對照不顯色,應怎樣研究和搜索根本原因?

     

    試驗檢測結果顯示白板,同時(shí)陽(yáng)性對照不顯色,普遍根本原因如下所示:

     

    問(wèn)題⑴:漏加或是誤加實(shí)驗試劑;

     

    處理辦法:常規檢查試驗檢測記載和余下的實(shí)驗試劑。次次加液前均應核查標簽貼。

     

    問(wèn)題⑵:實(shí)驗試劑逾期;

     

    處理辦法:采用有效期限內的中海產(chǎn)品。

     

    問(wèn)題⑶:發(fā)現洗板液制備中如容量瓶不干凈含HRP酶抑制物等情況;

     

    處理辦法:中海生物技術(shù)采用干凈整潔的容器,科學(xué)合理制備實(shí)驗試劑。

     

    問(wèn)題⑷:溫育的時(shí)長(cháng)或環(huán)境溫度不足;

     

    處理辦法:校準溫育箱環(huán)境溫度。

     

    問(wèn)題⑸:標準品失活或是丟失;

     

    處理辦法:標準品科學(xué)合理儲存、充分均勻溶解和混勻。

     

    問(wèn)題⑹:抗體失活或是丟失;

     

    處理辦法:替換抗體或是提升抗體濃度值

     

    問(wèn)題⑺:酶失活或是丟失

     

    常規檢查手段:把正常濃度值的酶再進(jìn)行稀釋二十至一百倍,取五微升添加五十微升的顯色底物,結束后顯色有沒(méi)有能到達壹上下,可做為酶的大概估測。

     

    處理辦法:替換酶或是提升酶的濃度值。

     

    問(wèn)題⑻:顯色底物失活

     

    常規檢查手段:加一定量的工作濃度值的酶,TMB有沒(méi)有快速顯色。

     

    解決辦法:替換顯色底物.

     

    ㈣試驗檢測結果顯示空白背景高,其普遍根本原因如下所示:

     

    問(wèn)題⑴:洗板不干凈;

     

    處理辦法:充分的清洗,完全拍干;洗板要杜絕交叉式造成污染;濃縮洗液準確無(wú)誤制備;吸嘴最好使用一次;加樣和加酶拍板的濾紙應丟掉不用,更不要多次采用,不然易產(chǎn)生造成污染。

     

    問(wèn)題⑵:顯色液發(fā)生變質(zhì)或是實(shí)驗試劑逾期;

     

    處理辦法:常規檢查試劑盒有效期限。

     

    問(wèn)題⑶:實(shí)驗試劑進(jìn)行稀釋不正確,如加酶的濃度值過(guò)高;

     

    處理辦法:請按照中 海使用說(shuō)明書(shū)所述的稀釋倍數制備;

     

    問(wèn)題⑷:蒸溜水受酶等造成污染;

     

    處理辦法:中海生物采用新鮮的蒸溜水;

     

    問(wèn)題⑸:實(shí)驗試劑混合使用;

     

    處理辦法:不一樣生產(chǎn)批號實(shí)驗試劑勿混合使用。

     

    問(wèn)題⑹:恒溫培養箱環(huán)境溫度高于三十七攝氏度或持續時(shí)間太久。

     

    處理辦法:顯色反應時(shí)長(cháng)盡可能減少。


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