前期無(wú)菌準備工作：

⑴提早一個(gè)鐘頭左右時(shí)間開(kāi)啟微生物實(shí)驗室紫外燈進(jìn)行消毒滅菌處理

⑵工作人員的衣物和手，做好清潔衛生和消毒殺菌；

⑶把用來(lái)微生物培養基所需容器與接種的器具和中海培養基等做好滅菌處理；

⑷全部的無(wú)菌操作都需在酒精燈旁進(jìn)行操作。

中海培養基配制：

⑴LB肉湯：肉湯粉三百三十克，葡萄糖五克，蒸餾水一千毫升；

⑵營(yíng)養瓊脂培養基：瓊脂培養基粉三百克，葡萄糖五克，蒸餾水一千毫升。

倒平板步驟操作流程：

⑴培養皿經(jīng)過(guò)滅菌處理后擺放在火苗旁的桌面上，右手拿配有中海培養基的錐形瓶，左手拿掉棉塞，右手拿錐形瓶，使瓶口快速進(jìn)行火苗；

⑵中海生物技術(shù)人員的左手把培養皿開(kāi)啟一條稍超過(guò)瓶口的間隙，右手將錐形瓶中的十至二十毫升中'海培養基倒進(jìn)培養皿，左手馬上蓋好培養皿的皿蓋后慢慢混合均勻。

⑶大約等差不多五至十分鐘平板冷卻凝固后，把平板倒過(guò)來(lái)擺放，使皿底在上，皿蓋在下。

平板劃線(xiàn)流程操作：

⑴將接種環(huán)放置在火苗上灼燒，一直到接種環(huán)燒紅；

⑵在火苗旁冷卻后接種環(huán)，并開(kāi)啟內盛菌液的試管的棉塞；

⑶將試管口經(jīng)過(guò)火苗。中海生物wap.91anmoyi.cn培養基廠(chǎng)家

⑷將已冷卻后的接種環(huán)伸入菌液中，沾取一環(huán)菌液；

⑸將試管口經(jīng)過(guò)火苗，并塞上棉塞；

⑹左手將皿蓋開(kāi)啟一個(gè)間隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)快速滲入平板內，劃三至五條平行線(xiàn)，蓋緊皿蓋。要注意不能刮破培養基。

⑺灼燒接種環(huán)待其冷卻后，從第一區域劃線(xiàn)的尾端逐漸往第二區域內劃線(xiàn)。多次重復上述操作流程，在三區域內劃線(xiàn)。留意不能將最后一區域的劃線(xiàn)與第一區連在一起。

⑻將平板倒放，放進(jìn)培養箱中培養。

進(jìn)行稀釋操作流程：

⑴將各自?xún)仁⒕藕辽牧г嚬軠缇幚?，并?0^6的順序編號。

⑵用移液管抽取1毫升培養的菌液，灌入十倍稀釋的試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸3次，使菌液與水完全混合均勻。

⑶從十倍稀釋的試管中抽取一毫升稀釋液，灌入一百零二倍稀釋的試管中，多次重復第2步的混合均勻進(jìn)行操作。依次類(lèi)推直達成功完成最后一個(gè)試管的稀釋。注：移液管必須進(jìn)行滅菌處理。進(jìn)行操作時(shí)，試管口和移液管應在離火苗的一至二厘米處。

涂布平板操作流程：

⑴將涂布器浸在內盛酒精的燒杯中；

⑵取不超過(guò)0.1毫升少許菌液，滴加到中.海培養基外表面；

⑶將沾有少許酒精的涂布器在火苗上點(diǎn)燃，待酒精燒盡后，冷卻后八至十秒；

⑷用涂布器將菌液均衡地涂布在培養基外表。涂布時(shí)可旋轉培養皿，使涂布均衡。

需要注意事項：

⑴將涂布器尾端浸在內盛70%濃度酒精的燒杯中。取出來(lái)時(shí)要讓多出的酒精在燒杯中滴盡，接著(zhù)將沾有少許酒精的涂布器在火苗上燃燒。

⑵操作流程中一定要留意防火安全!不能將溫度過(guò)高的涂布器放置在存放酒精的燒杯中，防止燃燒其中的酒精。

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